Agar de Hierro de Kligler

Uso
Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de alimentos
para la diferenciación de enterobacterias, en base a la
fermentación de hidratos de carbono y a la producción de ácido
sulfhídrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan
los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa
y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato
de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico,
el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los
cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de
hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente
solidificante.
Por fermentación de azúcares se producen ácidos que se detectan
por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en
medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno
el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el
típico sulfuro de hierro de color negro.

Contenido y composición
Código B0223405: envase x 100 g.
Código B0223406: envase x 500 g

Formula ( en gramos por litros)

Pep tona de ca rne......................................................................................................13.0.
Clo ruro de sodio.......................................................................................................... 5.0.
Lac tosa.....................................................................................................................................10.0.
Tripteína..................................................................................................................................10.0.
Glucosa ...................................................................................................................................... 1.0.
Citrato de hierro y amo nio............................................................................ 0.5.
Tios ulfa to de sodio.................................................................................................... 0.3.
Rojo de fenol..............................................................................................................0.025.
Agar...............................................................................................................................................15.0.

pH final: 7.3 ± 0.2

Instrucciones

Suspender 54.8 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar
reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2
minutos hasta disolución total.
Distribuir en tubos, en volumen que ocupe hasta la tercera parte de
los mismos. Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos.
Enfriar y dejar solidificar en posición inclinada (pico de flauta profundo).

Características del producto

Medio de cultivo deshidratado: color beige amarillento, homogéneo,
libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color rojo.

Almacenamiento

Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.

Procedimiento

Siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, con aguja
de inoculación inocular el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo
sobre la superficie del mismo.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37°C durante 18 a 24 horas.

Interpretación de los resultados

Observar el color del medio de cultivo y la producción de gas.
1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo
amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo
amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo
rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4- La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo
indican que el microorganismo produce gas.
5- El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo
produce ácido sulfhídrico.