Agar Citrato de Simmons

Uso
Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base
a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y
energía.

Fundamento

En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente
de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono.
Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano.
Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es
cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico,
el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color
azul en medio alcalino y el agar es el agente solidificante.
El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos
capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono usan
sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente
producción de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras
de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico.
El desdoblamiento del citrato genera progresivamente, oxalacetato
y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen
a ácidos orgánicos que al ser utilizados como fuente de carbono,
producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces
vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.

Contenido y composición

Código B0213205: envase x 100 g.
Código B0213206: envase x 500 g.
Simmons Citrato Agar

FÓRMULA (en gramos por litro)

Citrato de sodio...............................................................................................................2.0
Cloruro de sodio..........................................................................................................5.0
Fosfa to dipotásico...................................................................................................... 1.0.
Fosfa to monoamónico............................................................................................ 1.0.
Sulfa to de magnesio................................................................................................. 0.2.
Azul de bromotimol...............................................................................................0.08.
Agar...............................................................................................................................................15.0.
pH final: 6.9 ± 0.2


Instrucciones

Suspender 24,2 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar reposar
5 minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición
durante 1 o 2 minutos para disolución total. Distribuir en tubos
y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Enfriar y solidificar en posición inclinada (pico de flauta).

Características del producto

Medio de cultivo deshidratado: color amarillo-verdoso, homogéneo,
libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color verde.

Almacenamiento

Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.

Procedimiento

Siembra
Estriar la superficie del medio de cultivo.

Incubación

En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 24-72 horas.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 7 días de incubación.

Interpretación de los resultados

- Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el
pico de flauta.
- Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde
del medio de cultivo.

Agar MacConkey

INTRODUCCIÓN:
El medio Agar MacConkey preparado por BIOBACTER
LTDA en placa de petri desechable, es una presentación
de uso específico para el aislamiento e identificación a
nivel clínico de patógenos entéricos basada en la
fermentación ó carencia de fermentación de un disacárido
en este caso lactosa. Este medio es inhibitorio de cocos
gram positivos.

COMPONENTES:
1. Caja por 10 unidades
2. Inserto

MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS:
1. Asas Bacteriológicas
2. Guantes estériles
3. Tapabocas
4. Estufa a 37°C
5. Mechero de Bunsen

METODOLOGÍA.
Principio del método:
Los microorganismos entéricos sean ellos patógenos
primarios ó no, juegan un papel relevante en patología
humana como agentes etiológicos en una amplia
variedad de situaciones clínicas siendo su aislamiento e
identificación de suma importancia para el manejo clínico
y terapéutico del cuadro en estudio. El medio Agar
MacConkey tiene una utilización muy común para este
propósito específico. El agar MacConkey se prepara a partir
del medio de cultivo deshidratado, materia prima
producida por la casa BBL y tiene la siguiente composición:

Peptona ................20.0
Lactosa .................10.0
Sales biliares .........1.5
Cloruro de Na .......5.0
Rojo neutro ...........0.03
Cristal violeta....... 0.001
Agar ......................15.0
pH final 7.1+/-0.2

Agar E.M.B

Uso

Medio adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos,
a partir de muestras clínicas, alimentos y otros materiales
de importancia sanitaria.

Fundamento

La fórmula original de este medio de cultivo, fue modificada por Levine, quien eliminó la sacarosa e incrementó la concentración de lactosa, logrando así una mejor diferenciación de cepas de Escherichia coli.
Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento
de enterobacterias.
En el medio de cultivo, la peptona es la fuente nutritiva y la lactosa
es el hidrato de carbono fermentable. La combinación utilizada de
eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos
Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas, y también,
permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras
de lactosa. El agar es el agente solidificante.
Los microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias
de color azulado-negro, con brillo metálico o mucosas. Las colonias
producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son
incoloras.
También, pueden crecer especies de Candida y se observan como
colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite
el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp.
crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes,
mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas se
observan como colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir
aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa
al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus
membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo
de especies de Salmonella y Shigella.

Contenido y composición

Código B0410484: 6 frascos x 50 ml.
Código B2310431: envase x 10 placas.
Levine E.M.B. Agar (con Eosina
y Azul de Metileno)

FÓRMULA
Pept ona...............................................................................................................................10.0 g
Lact osa................................................................................................................................10.0 g
Fosfat o dipotásico................................................................................................. 2.0 g
Eosina........................................................................................................................................ 0.4 g
Azul de met ile no............................................................................................... 0.065 g
Agar..........................................................................................................................................15.0 g
Agua purifica da..................................................................................................1000 ml
pH final: 7,1 ± 0.2


Instrucciones

Medio de cultivo listo para usar en frascos
Colocar los frascos cerrados en baño maría y llevar a ebullición para
fundir el medio de cultivo sólido contenido en los mismos.
Una vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar cuidadosamente
los frascos del baño maría y dejar enfriar.
Cuando alcanzan temperatura 45-50 ºC, abrirlos y distribuir aproximadamente
15 ml en placas de Petri estériles.
Placas listas para usar.

Características del producto

Medio de cultivo color púrpura vinoso.
Nota: en el caso del medio de cultivo listo para usar en frascos, durante
la esterilización se reduce el azul de metileno al color naranja.
El color púrpura se restaura por agitación. La presencia de un precipitado
en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido,
ya que es parte esencial del mismo.

Almacenamiento

Medio de cultivo listo para usar en frascos a 10-35 ºC.
Medio de cultivo listo para usar en placas a 2-8 ºC.

Procedimiento

Siembra
Directa, estriando la superficie del medio de cultivo.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

Incubación

En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas.

Interpretación de los resultados

Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias de color
negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo
metálico.
Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color
del medio, incoloras.

Agar para Estafilococos 110

USO

El Agar Estafilococos 110 es utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos en base a la fermentación de manitol, la formación de pigmento y la hidrólisis de gelatina.

EXPLICACIÓN

En 1942 Koch reportó que los estafilococos crecían selectivamente en medios con una concentración alta de cloruro de sodio. Posteriormente Chapman, Lieb y Curcio reportaron que las cepas típicas de estafilococos patógenos fermentan el manitol, producen pigmento y licuan la gelatina. Chapman utilizó estas propiedades para desarrollar un medio selectivo y diferencial llamado Agar Estafilococos 110. En este medio la peptona provee la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales. El extracto de levadura proporciona vitaminas del complejo B. La alta concentración de cloruro de sodio tiene un efecto en el desarrollo selectivo de los estafilicocos. La lacosa y el D- manitol proporcionan la fuente de energía. La gelatina es el sustrato para la enzima gelatinasa. El agar es usado como agente solidificante.


FORMULA

Gelatina Bacteriológica..... 30.0               Lactosa 2.0

Extracto de Levadura .....2.5                    D- Manitol 10.0

Peptona de Caseína .....10.0                     Cloruro de Sodio 75.0

Fosfato dipotásico ....5.0                         Agar Bacteriológico 15.0

pH 7.0 ± 0.2


PREPARACIÓN

Método:
Suspender 149 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir
durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una
temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas de Petri estériles.
Procedimiento:
1. Sembrar las placas por el método de estría e incubarlas a 35 ± 2°C durante 24 a 48 horas.
2. Para Observar la fermentación del Manitol, adicionar unas gotas del indicador de azul de bromotimol en el lugar
donde previamente se ha tomado una colonia.

RESULTADO

Almacenamiento: 2-30°C.
Caducidad: 4 años en frasco cerrado.
Presentación: Frasco con 450 g
Caja con 20 sobres para un litro
Medio preparado con 10 placas

Agar Caldo de urea

El agar urea es un medio sólido diferencial para microorganismos, en especial los miembros de la especie enterobacteriaceae, según su capacidad de producir ureasa.
Chris tensen fuequien orientó los primeros trabajos en busca de un medio que permitiera la detección de bacterias capaces de descomponer la urea.
Realiza la diferenciación entre organismos proteeae rápidos positivos ala ureasa y otros organismos positivos a la ureasa: citrobacter, enterobacter, klebsiella.

Ureasa: es una enzima que cataliza la hidrólisis de urea a dióxido de carbono y amoníacoEnterobacteriaceae: es una familia de bacterias Gram negativas que contiene más de 30 géneros y más de 100 especies que pueden tener morfología de bacilos o cocos.

Fundamentos

Este medio es menos tamponado queel Caldo Urea además tiene componentes nutritivos y energéticos, lo que permite un crecimiento más diversificado de microorganismos y una detección más amplia de ureasa positivos.
Cuando losorganismos utilizan urea, se produce amoniaco durante la incubación, lo que hace la reacción de dichos medios alcalina y genera un color rosa rojo. En consecuencia la producción de ureasa puede detectarsemediante el cambio en el indicador rojo fenol.

Tampón: una disolución compuesta por el ion común de un ácido débil o una base débil

Formula por litro. 
Urea........................................................ 20,0 g
D (+)-Glucosa.......................................... 1,0 g
Peptona de Gelatina............................... 1,0 g
Potasio di-Hidrógeno Fosfato................. 2, g 
Rojo de Fenol.......................................... 0,012 g
Cloruro de sodio......................................... 5,0 g

PH final: 6,8 ± 0,2

Control físico-químico:
Aspecto: polvo finoColor: naranja-rojo
Solubilidad: total

Agar de Hierro de Kligler

Uso
Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de alimentos
para la diferenciación de enterobacterias, en base a la
fermentación de hidratos de carbono y a la producción de ácido
sulfhídrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan
los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa
y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato
de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico,
el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los
cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de
hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente
solidificante.
Por fermentación de azúcares se producen ácidos que se detectan
por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en
medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno
el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el
típico sulfuro de hierro de color negro.

Contenido y composición
Código B0223405: envase x 100 g.
Código B0223406: envase x 500 g

Formula ( en gramos por litros)

Pep tona de ca rne......................................................................................................13.0.
Clo ruro de sodio.......................................................................................................... 5.0.
Lac tosa.....................................................................................................................................10.0.
Tripteína..................................................................................................................................10.0.
Glucosa ...................................................................................................................................... 1.0.
Citrato de hierro y amo nio............................................................................ 0.5.
Tios ulfa to de sodio.................................................................................................... 0.3.
Rojo de fenol..............................................................................................................0.025.
Agar...............................................................................................................................................15.0.

pH final: 7.3 ± 0.2

Instrucciones

Suspender 54.8 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar
reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2
minutos hasta disolución total.
Distribuir en tubos, en volumen que ocupe hasta la tercera parte de
los mismos. Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos.
Enfriar y dejar solidificar en posición inclinada (pico de flauta profundo).

Características del producto

Medio de cultivo deshidratado: color beige amarillento, homogéneo,
libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color rojo.

Almacenamiento

Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.

Procedimiento

Siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, con aguja
de inoculación inocular el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo
sobre la superficie del mismo.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37°C durante 18 a 24 horas.

Interpretación de los resultados

Observar el color del medio de cultivo y la producción de gas.
1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo
amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo
amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo
rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4- La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo
indican que el microorganismo produce gas.
5- El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo
produce ácido sulfhídrico.

211400 AGAR HIERRO Y TRIPLE AZUCAR BIOXO

Diferenciación e identificación de enterobacterias.

Medio diferencial muy usado en la identificación de enterobacterias patógenas y saprofitas en los análisis
bacteriológicos rutinarios de heces, principalmente.
Este medio se usa como clave para iniciar la identificación de enterobacterias en algunos esquemas de la FDA.

Formula por litro de agua destilada:

Peptona de caseína                         10.0 g

Peptona de carne                            10.0 g

Cloruro de sodio                              5.0 g

Lactosa                                           10.0 g

Sacarosa                                         10.0 g

Dextrosa                                         1.00 g

Sulfato de amonio ferroso               0.2 g

Rojo de fenol                                 .025 g

Agar                                               13.0 g

Tiosulfato de sodio                            .2 g

pH final 7.3 +/- 0.2


Preparación:

1. Suspender 59.4 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada.
2. Remojar de 10 a 15 minutos.
3. Calentar agitando con frecuencia hasta ebullición y completa disolución.
4. Esterilizar a 118°C durante 15 minutos. Los tubos se deben enfriar en posición inclinada de manera que
el medio de cultivo en el fondo del tubo alcance una profundidad de 1.5 a 2.0 cm.

Usos:

Su modo de acción es semejante al medio de Kliger que contiene azúcares, adicionado además con 1% de sacarosa. Esto permite el reconocimiento y exclusión de Proteus.
Hafnia y Providencia no fermentan la lactosa o lo hacen muy lentamente y sí en cambio permite excluir a ese grupo de bacterias de Salmonella y Shigella.